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大鼠血清使用時(shí)都需要注意些什么?

更新時(shí)間:2022-04-12      點(diǎn)擊次數(shù):2408
  大鼠血清來(lái)源于非免疫的大鼠宿主,用脂質(zhì)提取并用含有NaN3的PBS溶液透析以提高其透明度。建議用PBS將封閉血清原液稀釋5-20倍,配制5%-20%的工作液,直接滴在組織切片或細(xì)胞涂片上,37℃孵育10-30分鐘,取出血清無(wú)需洗滌,滴加適量稀釋的一抗工作液,37℃孵育1-2h或4℃過(guò)夜。注意:封閉血清不能含有目的蛋白,與一抗不同。可以使用與二抗來(lái)源相同的封閉血清。
 
 

大鼠血清
 

 

  大鼠血清使用注意事項(xiàng):
  1、樣品中不能含有(NaN3),因?yàn)椋∟aN3)是辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的抑制劑。
  2、樣品采集后應(yīng)盡快提取。提取應(yīng)根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行。提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如不能立即進(jìn)行試驗(yàn),試樣可在-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
  3、樣品應(yīng)充分離心,無(wú)溶血和顆粒。
  4、實(shí)驗(yàn)應(yīng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判斷必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
  5、酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中,并用干燥劑保存。
  6、建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣品和空白對(duì)照均一式兩份檢測(cè),取平均值,以減少實(shí)驗(yàn)誤差。
  7、記住樣品已經(jīng)稀釋了5倍,樣品的實(shí)際濃度是通過(guò)計(jì)算結(jié)果乘以5來(lái)計(jì)算的。
  8、本試劑盒的定量范圍為11.25-360pg/ml。超出此范圍,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的延伸計(jì)算。這不是一個(gè)準(zhǔn)確的定量結(jié)果。請(qǐng)使用專(zhuān)用稀釋劑稀釋確定準(zhǔn)確結(jié)果(在11.25-360pg/ml范圍內(nèi)),再乘以總稀釋倍數(shù)即可得到樣品的最終濃度。
  9、如果顏色太淺,可適當(dāng)延長(zhǎng)底物孵育時(shí)間。
  10、為避免交叉污染,每次添加標(biāo)準(zhǔn)品、樣品和空白對(duì)照品時(shí)都應(yīng)更換吸頭;酶標(biāo)工作液、樣品稀釋液、底物等常用組分加懸臂,不得接觸微孔;請(qǐng)勿重復(fù)使用密封膜。
  11、大鼠血清試劑盒應(yīng)在保質(zhì)期內(nèi)使用,不得混用不同批次的試劑。
  12、基材B對(duì)光敏感,不宜長(zhǎng)時(shí)間暴露在光線(xiàn)下。
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